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4´,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐，简称DAPI，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。DAPI溶液用水配制，参考浓度20mg/ml，加热有助于溶解。用于细胞核染色时，推荐的DAPI工作浓度为0.5～10μg/ml。

CAS：28718-90-3
分子式：C₁₆H₁₅N₅·2HCl
分子量：350.25
危险代码：R：36/37/38 S：26-36
纯度：≥90%(HPLC和TLC)
外观：黄色结晶性粉末
储存条件：-20℃避光保存

使用方法
配制母液：用双蒸水溶解，终浓度为1mg/ml。本产品不可以用缓冲液直接溶解。-20℃可保存1年，建议分装保存，避免反复冻融。
1．配制工作液：用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10μg/ml）。
2．固定的细胞或组织染色：对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI染色。
① 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。
  对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
② 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
③ 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360nm，发射波长460nm。
3．活细胞或组织染色：
① 细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。
② 在37℃培养细胞10～20分钟。
③ 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
④ 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360nm，发射波长460nm。

注意事项：
1．DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2．荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3．为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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